解決方案
SOLUTION
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基因擴增實驗又稱 PCR 實驗，其特點是能將微量的 DNA 大幅增加， PCR 是分子生物學研究和實驗的常規方法，廣泛應用于生物學各個領域，例如：檢驗艾滋病、乙型肝炎、禽疫病、癌基因的檢測和診斷， DNA 指紋、個體識別、子鑒別及法醫物證，動、植物檢疫，動物及其衍生產品檢測，動物飼料、化妝品、食品衛生檢測，轉基因作物與轉基因微生物檢測等。 一、 PCR 實驗室平面布局 基因擴增實驗室又稱 PCR 實驗室，實驗室原則上分為4個單獨的工作區域，前兩區為擴增前區，后兩區為擴增后區。擴增前區與擴增后區應嚴格分開。實驗材料、試劑、記錄紙、筆、清潔材料等，只能從擴增前區流向擴增后區，即從試劑準備區﹣樣品制備區﹣→擴增區﹣擴增產物分析區，不得逆向流動。實驗室的氣流也應從擴增前區流向擴增后區，不得逆向流動。各工作區域應設置緩沖間，工作間與緩沖間之間宜安裝連鎖裝置。不同功能的核酸檢驗工作區應是分隔獨立的工作室，并有明顯的標志，各區間不能直通。各區之間如果是緊密相連，需安裝物品傳遞窗。每個工作區域的頂部應安裝紫外燈，紫外燈的波長為254nm，安裝數量為每20m2安裝一支40W的紫外燈。 實驗室較為理想的布局模式為有一個專用走廊，試劑準備區、樣品制備區、擴增區和產物分析區很規范地排列在一起，前三個區各有一個緩沖間，可供換工作服和工作鞋使用，頂上可裝一紫外燈。內實驗區域設為正壓或常壓狀態，緩沖間內設為負壓狀態（可上設一抽風裝置），使這三個區的空氣流向為由實驗區域內向外，緩沖間內通向內實驗室和走廊的門可安裝一種連鎖裝置，當一個門打開時，另一門必須處于關閉狀態，防止出現兩個門同時打開的情況。產物分析區可不設緩沖間，但應設為負壓狀態（裝一個排風扇即可），使空氣流向由外向內，以防止擴增產物的隨空氣流出。每一區域都須有明確的標記，工作按試劑準備區、樣品制備區、擴增區至產物分析區單一流向進行，各區的儀器設備包括工作服、鞋、實驗記錄本和筆等都必須專用。如果無法做到以上模式，以下基本要求必須做到： (1）四個區域必須是相互獨立的。 (2）各區的儀器設備及各種物品必須是專用的。 (3）各區完全獨立，緩沖間可有可無。如為一個區套一個區的模式，區間不能直通，應有緩沖間，供換工作服及鞋子用，并保證兩個區域間始終處于完全的分隔狀態。 (4）產物分析區應安裝排風扇或其他抽風裝置，維持負壓。 二、各區功能及主要設備 (1）試劑準備區：擴增試劑的配制、分裝和保存。未設緩沖間的和準備區，工作區域為正壓。用于擴增的試劑應冰凍儲存。主要設備有天平、冰箱、離心機、加樣器、振蕩器、紫外燈。 (2）樣品制備區：實驗室樣品的混樣和測試樣品的制備。未設緩沖間時工作區域為負壓或減壓，可安裝排風系統。所用的器具在使用前應經過徹底清洗并消毒，防止交叉污染。主要設備有冰箱、生物安全柜（或潔凈工作臺、排風柜）、離心機、加樣器、振蕩器、恒溫水浴、上下水設備、廢棄物容器、紫外燈。根據制備樣品的性質和要求決定操作臺是選用生物安全柜、潔凈工作臺還是排毒柜，如疾控中心、臨床醫學實驗室一般選用生物安全柜，植物轉基因、檢疫等可選用排毒柜，樣品制備需要較高潔凈條件的選用潔凈工作臺。 (3）擴增區： PCR 擴增反應體系的配制和模板的加入，核酸擴增。未設緩沖間的擴增區，工作區域為負壓或減壓，可安裝排風系統。加樣應在超（生物安全柜）內進行，超凈工作臺的氣流方向宜選擇垂流式。核酸擴增設備、冰箱、潔凈工作臺（生物安全柜）、離心機、加樣器、廢棄物容器、紫外燈。 (4）擴增產物分析區：擴增產物的測定。未設緩沖間的擴增產物區，工作區域為負壓或減壓，應安裝排風系統。若實驗僅采用全自動擴增檢測儀（如實時熒光定量 PCR 儀），可將擴增區與擴增產物分析區合并為一個區。本區所使用的儀器設備有酶標儀、洗板機、加樣器和浴箱等。
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